En un arrecife viven Marlin y Coral que son una pareja de peces payaso los cuales esperan el nacimiento de sus más de 400 huevos. Viven felices hasta que aparece una barracuda que amenaza con devorarlos, Coral intenta proteger los huevos y Marlin queda inconsciente en el ataque. Al despertar, se entera de que Coral y sus hijos habían muerto en el ataque a excepción de uno de ellos, Nemo. Debido a que su huevo había sido herido en el ataque, Nemo se desarrolla con una limitación en su capacidad de nadar: Su aleta derecha es más pequeña y tiembla mucho.
Con el tiempo Marlin se vuelve un padre sobreprotector a causa del suceso con la barracuda. Marlin avergüenza a Nemo durante una excursión escolar, por lo que él aprovecha esta ocasión y se escapa del arrecife. Posteriormente es capturado por buceadores. Cuando su padre, Marlin, se da cuenta que su hijo ha escapado, emprende una búsqueda en la que se encuentra con Dory, un pez de buen corazón y optimista, que sufre de pérdida de memoria a corto plazo. Marlin y Dory se encuentran con tres tiburones: Bruce, Anchor y Chum, en un antiguo campo de minas, en donde Marlin descubre la máscara de uno de los buzos que capturó a Nemo, la cual se le había caído y se da cuenta de una dirección escrita en ella, pero Marlin en el afán de encontrar a su hijo, discute con Dory y accidentalmente a ella le da un sangrado por la nariz, el olor de la sangre hace que Bruce despierte un insaciable deseo de alimentación, por lo que empieza a perseguir a Marlin y a Dory pero ellos logran escapar de Bruce.
El captor de Nemo —P. Sherman, un dentista— lo coloca en un tanque de peces en su oficina en el puerto de Sídney. Allí Nemo conoce a los peces del acuario llamado Tank Gang que incluye a Globo, un pez globo que se infla al asustarse; Bubbles, una espiga amarilla obsesionada con las burbujas; Peach, una estrella de mar; Gluglu, un gramma real; Jacques, un camarón limpiador pacífico y Deb, una damisela de cola negra que cree que su reflejo es su hermana gemela. Cuando Nemo se atora, aparece el líder del grupo: Gill, un ídolo moro que al igual que Nemo, tiene una aleta rota. Él le incita a salir por su cuenta y lo consigue.
De vuelta al océano, la máscara cae en lo profundo del océano. Durante una lucha peligrosa con un rape abisal, Dory ve la máscara de buceo y logra leer lo que está escrito: «P. Sherman Calle Wallaby 42 Sydney» (Sídney en español). Ella logra recordar esa dirección y no para de repetirla.
Esa noche, Nemo es sometido a un ritual de iniciación por el Tank Gang. Una vez cumplido, Gill le da el apodo de «Tiburoncín» («Cebo» en España) y le explica su plan para escapar del acuario antes de que Darla, la sobrina del dentista se lo lleve.
Después de recibir instrucciones para llegar a Sídney , Marlin y Dory terminan por romper una de las reglas y se encuentran con una floración de las medusas en la que inician una carrera para salir de ellas, sin embargo eso casi los mata, debido a esto Marlin pierde el conocimiento. En la pecera Gill pone en acción su plan de escape, el cual implica la interferencia en el filtro del tanque, lo que obligaria al dentista a meter los peces en bolsas con el fin de limpiar el acuario. Nemo por poco lo logra pero casi es cortado en pedazos, por lo que Gill se arrepiente.
Más tarde, Marlin y Dory despiertan en una colonia de tortugas, entre ellas Crush y su hijo Chiqui, ahí Marlin comienza a entender que aunque vale la pena ser precavido también hace falta tomar riesgos de vez en cuando. Él le cuenta su historia a todos y se va difundiendo por los mares hasta que la historia llega a Nigel, un pelicano amigo de los peces de la pecera.
Mientras tanto, Nemo está triste y Gill le pide perdón por poner su vida en peligro, Nigel llega y les cuenta toda la historia. Entonces Nemo lo intenta de nuevo y los peces se emocionan. En la corriente, Marlin aprende que las tortugas viven más de 150 años, siendo que Nemo quería saber cuanto viven. Al salir de la Corriente de Australia Oriental, Marlin y Dory son engullidos por una ballena azul. En la pecera han crecido algas verdes, lo que indica que el plan ya casi funciona.
Dentro de la boca de la ballena, Marlin se da cuenta de que su compañera se logra comunicar con la ballena, lo que los lleva a Port Jackson y ahí la ballena los expulsa a través de su espiráculo; Se encuentran con Nigel, quien reconoce a Marlin por las historias que había escuchado en el puerto y los lleva a la oficina del dentista. En la pecera, el filtro fue reemplazado por uno de alta tecnología y todos entran en pánico. La sobrina del dentista Darla, llegó a la oficina y Nemo intenta hacerse el muerto para salvarse. Marlin ve a su hijo Nemo y cree que está muerto, por lo que Gill ayuda a Nemo a escaparse hacia un desagüe. Dory pierde la memoria y se confunde, pero se encuentra con Nemo, quien alcanzó el océano. La memoria de Dory se restaura después de que ella lee la palabra «Sydney» en una tubería cercana. Luego ella encuentra a Nemo y lo guía para ayudarse a encontrar con Marlin . En ese momento Dory queda atrapada en una red de pesca, esto hace que Nemo entre en la red y dirige el cardumen que también está dentro de la red, a nadar hacia abajo para romperla, lo que les permitiría escapar. Después de regresar a casa, Nemo va hacia la escuela y Marlin, ya no es un padre sobreprotector, y tranquilamente observa a Nemo nadar a lo lejos con Dory a su lado.
Al final de la película en el consultorio del dentista, el filtro de alta tecnología se rompe, por lo que les da la oportunidad a los peces de escapar hacia el puerto, pero se quedan flotando en el agua, todavía en sus bolsas de plástico.
Durante los créditos de la película, sale Mike Wazowski —personaje de la película Monsters, Inc.— nadando.
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